Biología de la mucosa de intestino delgado e inducción de respuesta inflamatoria local. Estudio de los mecanismos involucrados en un modelo experimental de enteropatía y en las enfermedades dependientes de gluten.
La enfermedad celíaca (EC) es una enteropatía crónica de muy alta frecuencia (1% en población general) causada por un grupo de proteínas presentes en trigo, cebada, centeno y avena. EC está fuertemente asociada a dos alelos HLA: DQ2 y DQ8, que constituyen los factores de susceptibilidad más ligados a una patología de base inmune. Sin embargo, estudios recientes indican que un conjunto de genes con contribución menor serían determinantes para definir las características de presentación de esta patología. Una serie de cambios histológicos caracterizan a la mucosa intestinal en EC al diagnóstico. Estas alteraciones revierten cuando el paciente sigue una estricta dieta libre de las proteínas tóxicas. Hasta el presente no se ha logrado desarrollar un modelo animal que reproduzca las lesiones histológicas observadas en EC. En nuestro laboratorio, hemos desarrollado un modelo experimental de enteropatía inducida por la administración intraluminal de ligandos de la inmunidad innata. En los últimos años, se ha prestado cada vez más atención a una condición, llamada Sensibilidad al gluten (SG), caracterizada por una serie de signos gastrointestinales difusos, sin serología ni histología asociada a EC, pero cuya sintomatología revierte completamente cuando se sigue una dieta estricta libre de gluten. No se conocen los mecanismos de patogenia, pero se propone que existe una respuesta inflamatoria inducida por péptidos derivados de gluten. Es una condición de muy alta frecuencia. Varios aspectos de la patogenia de EC son conocidos con detalle. Sin embargo, los mecanismos de daño y remodelamiento de la mucosa duodenal, así como los mecanismos de muerte celular no son comprendidos completamente. En este sentido, se estudian aspectos centrales de la biología de la mucosa intestinal evaluando vías de muerte celular, proliferación y diferenciación. Como fue mencionado estas patologías son de muy alta frecuencia, sin embargo presentan un elevado subdiagnóstico. Siendo la mejora en la eficiencia diagnóstica uno de los objetivos de investigación. Estas patologías son consecuencia de la ingesta de gluten y la única forma de tratamiento efectivo es la dieta de exclusión de las proteínas toxicas. Nuestro grupo ha desarrollado plataformas analíticas que permiten la certificación de productos libres de gluten.
  1. “Fractionation of wheat, barley and rye prolamins by cation-exchange FPLC”. Chirdo F.G., Fossati C.A. and Añón M.C. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1994. 42: 2460-2465. plSSN 0021-8561

  2. “Optimization of a competitive ELISA for quantification of prolamins in food”. Chirdo F.G., Añón M.A. and Fossati C.A. Food and Agricultural Immunology. 1995. 7 (4) 333-343. pISSN 0954-0105.

  3. “Development of high sensitive enzyme immunoassays for gliadin quantification using the streptavidin-biotin amplification system”. Chirdo F.G., Añón M.C. and Fossati C.A. Food and Agricultural Immunology. 1998. 10(2): 143-155. pISSN 0954-0105

  4. “Detection and characterization of antibodies specific to food antigens (gliadin, ovalbumin and -lactoglobulin) in human serum, saliva colostrum and milk”. Rumbo M., Chirdo F.G., Añón M.C. and Fossati C.A. Clinical and Experimental Immunology. 1998. 112 (3): 453-458. plSSN: 0009-9104

  5. “An innovative sandwich ELISA system based on an antibody cocktail for gluten analysis”. Sorell L., López J.A., Valdés I., Alfonso P., Camafeita E. Acevedo B., Chirdo F.G., Gavilondo J. and Méndez E. FEBS letters. 1998. 439 (1.2): 46-50. plSSN: 0014-5793

  6. “Presence of high levels of non degraded gliadin in breast milk from healthy mothers”. Chirdo F.G., Rumbo M., Añón M.C. and Fossati C.A. Scandinavian Journal of Gastroenterology. 1998. 33 (11): 1186-1192. plSSN: 0036-5521.

  7. “Analysis of anti-gliadin antibodies by immunoblotting analysis and Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay using gliadin fractions as antigens”. Chirdo F.G., Rumbo M., Carabajal P., Castagnino N., Mavromatopulos E., Cirincione V., Añón M.C. and Fossati C.A. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 1999. 29: 171-177. plSSN 0277-2116

  8. “Analysis of anti-prolamin monoclonal antibody reactivity using prolamin fractions purified by preparative electrophoresis”. Rumbo M., Chirdo F.G., Fossati C.A. and Añón M.C. Food and Agricultural Immunology. 2000. 12: 41-52. pISSN: 0954-0105.

  9. “Determination of anti--gliadin antibodies in serological test for coeliac disease”. Chirdo F.G., Rumbo M., Carabajal P., Castagnino N., Mavromatopulos E., Añón M.C. and Fossati C.A. Scandinavian Journal of Gastroenterology. 2000. 35 (5): 508-516. plSSN: 0036-5521

  10. “Evaluation of coeliac disease serological markers (anti-gliadin, anti-endomysium, anti-transglutaminase antibodies) in Down Syndrome patients”. Rumbo M., Chirdo F.G., Ben R., Saldungaray I. and Villalobos R. Digestive and Liver Disease. 2002. 34: 112-116. plSSN 1590-8658

  11. “In vitro presentation of gliadin-derived peptides by different cell lines”. Chirdo F.G, Zwimer N.W., Rumbo M. and Fossati C.A. Clinica Chimica Acta. 2002. 317: 151 – 158. plSSN: 0009-8981.

  12. “The role of dendritic cells in regulating mucosal immunity and tolerance”. Mowat, A Mcl., Donachie, A.M., Parker L.A., Robson, N.C., Beacock-Sharp. H, McIntyre L.J., Millington, O. and Chirdo F.G. Novartis Foundation Symposium “Generation and Effector Functions of Regulatory Lymphocytes”. Londres. Reino Unido. 2003. 252: 291-395. plSSN. 1528-2511

  13. “Anatomical and cellular basis of immunity and tolerance in the intestine” Mowat. A. Mcl., Millington O. and Chirdo F.G. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 2004. 39 Suppl 3: S723-4. plSSN: 0277-2116.

  14. “Oral tolerance. Overview and historical perspectives”. Mlc. Mowat A., Parker L.A., Beacock-Sharp H., Millington O.R. and Chirdo F.G. Annals of the New York Academy of Sciences. 2004. 1029: 1-8. plSSN: 0077-8923.

  15. “Characterizing monoclonal antibody epitopes by filtered gene fragment phage display”. Di Niro R., Ferrara F., Not T., Bradbury A., Chirdo F.G., Marzari R. and Sblattero D. The Biochemical Journal. 2005. 388: 889-894. pISSN: 0264-6021

  16. “Immunomodulatory Dendritic Cells in Intestinal Lamina Propia”. Chirdo F.G., Millington O.R., Beacock-Sharp H. and Mcl Mowat A. European Journal of Immunology. 2005. 35: 1831-1840. plSSN: 0014-2980.

  17. “Enfermedad celíaca. Nuevas perspectivas terapéuticas basadas en un mejor conocimiento de su patogenia molecular”. Chirdo F.G., Garrote J.A, Arranz E. Acta Gastroenterológica Latinoamericana. 2005. 35: 183-189. pISSN: 0300-9033

  18. “Towards a new gliadin reference material- Isolation and characterisation”. Van Eckert R., Berghofer E., Ciclitira P.J., Chirdo F.G, Denery-Papini S., Ellis J., Ferranti P., Goodwin P., Immer U., Mamone G., Mendez E., Mothes T., Novalin S., Osman A., Rumbo M., Stern M., Thorell L., Whim A., and Wieser H. Journal of Cereal Science. 2006. 43: 331-341. pISSN: 0733-5210

  19. “Interference of denaturing and reducing agents on the antigen/antibody interaction. Impact on the performance of quantitative immunoassays in gliadin analysis”. Doña V.V., Fossati C.A. and Chirdo F.G. European Food Research and Technology. 2008. 226: 591- 602. pISSN: 1438-2377

  20. “Deamidated gliadin peptides from epitopes that transglutaminase antibodies recognize” Korponay-Szabó I.R, Vecsei Z., Király R., Dahlbom I., Chirdo F., Nemes E., Fésüs L. and Mäki M. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 2008. 46(3):253-261. pISSN: 0277-2116

  21. ”Coeliac disease pathogenesis. The proinflammatory cytokine network”. Garrote J.A, Gómez-González E., Bernardo D., Arranz E. and Chirdo F. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 2008. 47 Suppl 1:S27-S32. ISSN: 0277-2116

  22. “Higher constitutive IL15Ra expression and lower IL-15 response threshold in Coeliac Disease patients”. Bernardo Ordiz D., Garrote JA, Allegretti Y., León A., Gomez E., Bermejo-Martin J., Calvo C, Riestra S., Fernandez-Salazar L., Blanco-Quirós A., Chirdo F., and Arranz E., Clinical Experimental Immunology. 2008. 154: 64-73. ISSN 0009-9104

  23. “Mucosal Tissue Transglutaminase expression in celiac disease”. Villanacci V., Not T., Sblattero D., Gaiotto T., Chirdo F., Galletti A., Bassotti G. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2009. 13(2):334-40. ISSN 1582-1838

  24. Doña V., Urrutia M., Bayardo M., Alzogaray V., Goldbaum F. and Chirdo F.G. Single domain antibodies are specially suited for quantitative determination of gliadins in denaturing conditions. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2010. 58(2):918-26. ISSN: 0021-8561

  25. Chirdo F., Menéndez A.M., Portela M.L., Sosa P., Toca M.C., Trifone L. y Vecchiarelli C. Prebióticos en salud Infantil. Archivos Argentinos de Pediatría. 2011. 109 (1): 49-55.

  26. Galipeau H., Rulli N.E., Jury J., Huang X., Araya R., Murray J.A., David C., Chirdo F., McCoy K. and Verdu E. Sensitization to gliadin induces enteropathy and insulitis in NOD-DQ8 mice The Journal of Immunology. 2011.187 (8):4338-46.

  27. Bayardo M., Punzi F., Bondar C., Chopita N. and Chirdo F. TG2 expression is synergistically enhanced by IFNγ and TNFα in human small intestine. Clinical Experimental Immunology. 2012. 168:95-104

  28. Chirdo FG y Arranz E. Enfermedad Celíaca: una inmunopatología muy frecuente pero poco conocida. Ciencia e Investigación. 2013. Tomo 63 num. 1: 57-70.

  29. Allegretti Y., Bondar C., Guzman L., Cueto Rua E., Chopita N., Fuertes M., Zwirner N.W. and Chirdo F.G. Broad MICA/B expression in the small bowel mucosa: a link between cellular stress and celiac disease PloSOne. 2013. 8(9): e73658.

  30. Bondar C., Plaza-Izurieta L., Fernandez-Jimenez N., Irastorza I., Withoff S., CEGEC, Chirdo F. and Bilbao JR. THEMIS and PTPRK in celiac intestinal mucosa: coexpression in disease and after in vitro gliadin challenge Eur J Human Genetics. 2014. 22: 358-362

  31. Bondar C., Araya R., Guzman L., Cueto Rua E., Chopita N. and Chirdo FG. Role of CXCR3/CXCL10 axis in immune cell recruitment into the small intestine in celiac disease PLoSOne. 2014. 9(2):e89068.

  32. Araya R., Jury J., Bondar C., Verdu E., and Chirdo F.G. Intraluminal administration of poly I:C causes an enteropathy that is exacerbated by administration of oral dietary antigen PloSOne. 2014. 9(6): e99236.

  33. Natalia M. Bottasso Arias, Marina García, Constanza Bondar, Luciana Guzman, Agustina Redondo, Nestor Chopita, Betina Córsico, Fernando G. Chirdo. Expression of Fatty Acid Binding Proteins (FABPs) in Celiac Disease enteropathy. Mediators of Inflammation. 2015, http://dx.doi.org/10.1155/2015/738563

  34. Heather J. Galipeau, Justin L. McCarville, Sina Huebener, Owen Litwin, Marlies Meisel, Bana Jabri, Yolanda Sanz, Joseph A. Murray, Manel Jordana, Armin Alaedini, Fernando G. Chirdo, Elena F. Verdu. Intestinal Microbiota modulates the response to dietary gluten in gnotobiotic mice. Am J Pathol. 2015. pii: S0002-9440(15)00476-9. doi: 10.1016/j.ajpath.2015.07.018.

  35. Enrique Montalvillo, David Bernardo, Beatriz Martínez-Abad, Yessica Allegretti, Luis Fernández-Salazar, Carmen Calvo, Fernando G. Chirdo, José A. Garrote and Eduardo Arranz Increased Intraepithelial Vα24 Invariant NKT Cells in the Celiac Duodenum. Nutrients 2015, 7, 8960–8976; doi:10.3390/nu7115444

  36. Vanesa Soledad Marin Viegas, Gonzalo Raúl Acevedo, Mariela Paula Bayardo, Fernando Gabriel Chirdo and Silvana Petruccelli. Production of the main celiac disease autoantigen by transient expression in Nicotiana benthamiana. Frontiers in Plant Science (section Plant Biotechnology). 2015. 6:1067. doi: 10.3389/fpls.2015.01067

  37. Romina E Araya., María Florencia Gomez Castro, Paula Carasi, Justin L. McCarville, Jennifer Jury, Allan M. Mowat, Elena F. Verdu and Fernando G. Chirdo. Mechanisms of innate immune activation by gluten peptide p31-43 in mice Am J Physiol. Gastrointestinal and Liver Physiology. 2016. 311: G40–G49 doi:10.1152/ajpgi.00435.2015.

Objetivo: Los pacientes celíacos y aquellos con sensibilidad al gluten requieren el consumo de productos alimenticios que no contengan proteínas tóxicas derivadas de trigo, cebada, centeno y avena.

Metodología: Las etapas del análisis consisten en la extracción de las proteínas tóxicas de las muestras en análisis (productos alimenticios). El extracto obtenido luego es analizado mediante una plataforma cuantitativa inmunoquímica (ELISA) desarrollada en nuestro laboratorio. Luego se realiza el análisis de los resultados obtenidos y la emisión de un informe.

STAN CONICET ST 3093
Objetivo: La citometría de flujo es una técnica de alta capacidad analítica para la evaluación de la expresión de marcadores celulares que caracterizan el linaje, el estado de activación, la proliferación y muerte celular, entre otras, aplicada a inmunología, hematología, microbiología, biología celular, oncología, en células de origen humano y animal, fisiología vegetal.

Metodología: Las etapas del análisis consisten en: * procesamiento de muestras biológicas de origen humano, animal o vegetal, lineas celulares, microorganismos * incubación con anticuerpos o sondas específicas unidos a fluorocromos * adquisición en el equipo de citometría de flujo * análisis de los parámetros adquiridos * separación de células por sorting mecánico.

STAN CONICET ST 2843

Plataforma de Citometría